近年來，Science、Nature、JEV 等各大期刊上高頻出現的方向之一，正是外泌體。

外泌體是什么？

外泌體（exosome）是由細胞內多泡體與細胞膜融合后，釋放到細胞外基質中的納米級囊泡。其內部可以包裹攜帶 RNA、DNA、蛋白質、脂質等多種信號分子，表面膜上還有豐富的抗原表達，可以通過循環系統到達其他細胞與組織，參與細胞間通訊，是一種新型的細胞間信號傳遞的媒介。

外泌體起源于質膜循環途徑中的膜腔或早期胞內體，這些膜腔或早期胞內體會向內凹陷形成管腔內膜泡（ILV），進一步發展成為多泡小體（MVB）完成包裝過程，多泡小體最后在細胞內分子馬達的牽引下與細胞表面融合，最終被分泌出去。

外泌體可以用來做什么？

目前已發現外泌體在腫瘤轉移、免疫調控機制、阿茲海默癥和免疫疾病等疑難雜癥的治療方面嶄露頭角，有望成為多種疾病的早期診斷標志物。

作為人體內的一類重要囊泡，外泌體自 2013 年起逐步成為科研熱點。以藥物遞送為例，由于外泌體所固有的長期循環能力和出色的生物相容性以及諸多優點（見下圖），使得其具有很大的潛力成為藥物遞送載體，適合于遞送各種化學物質、蛋白質、核酸和基因治療劑。

外泌體怎么提取？

獲得高純度的外泌體是開展后續研究的基礎。目前分離外泌體的方式有許多種，如：

▲ 色譜法

▲ 超濾法

▲ 多聚物沉淀法

▲ 磁珠免疫法等

但超速離心法仍舊是業內推崇的外泌體分離金標準，這是因為超速離心法可以準確地重復獲取外泌體，同時最大限度減少蛋白質聚集體和雜質離子的共純化現象。

如果選擇超速離心法，那么可以依托日立超速離心機，來獲取更高純度的外泌體。

基于超速離心法的CP100NX 外泌體分離方案

上面的表格中已經提到，依托于超速離心機的外泌體分離方案大致有兩種：分別是差速離心法和密度梯度離心法。

其中密度梯度離心法可以成功地將亞細胞成分（例如過氧化物酶體，線粒體等）分離到密度梯度溶液中的不同層中。外泌體粗提樣品被放置在梯度液頂部，當施加離心力時，樣品中的顆粒以特定的速率通過梯度，該梯度以從上到下的密度增加。

樣品中的外泌體將在 1.15-1.19 g/mL 的密度范圍富集，隨后可以通過分餾收集。密度梯度超速離心對從蛋白質聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效。在日常分離中，兩種離心方法可以搭配使用，會有助于獲取更高純度的外泌體。

分離外泌體流程（超速離心法）

1. 收集對數生長階段的細胞培養上清或組織液

2. 多功能臺式離心機，去除死細胞、生物聚集體和大型囊泡等

500 xg,10min；2000 xg,10min; 10,000 xg,30min, 4℃

3. CP100NX 超速離心機，差速離心法初步富集外泌體

100,000 xg, 2h, 4℃；P70AT 固定角轉

4. CP100NX 不連續密度梯度離心，進一步純化外泌體，回收 1.15-1.19 g/ml 介質液

100,000 xg, 16h, 4℃；P32ST 水平轉子

5. 日立CP100NX 超速離心機，溶劑置換

100,000 xg, 1h, 4℃

外泌體超速離心制備推薦方案

Eppendorf 超速離心機 CP100NX ? P70AT 固定角轉 ? P32ST 水平轉子

它具有以下特點幫助外泌體制備：

▲ 直觀：前置 47cm LED 顯示條，通過顏色/發光模式，運行狀態一目了然。

▲ 簡便：智能模塊化 LCD 觸屏操作鍵面，參數設置，運行操作，輕松自如。

▲ 安全：不平衡檢測及轉子壽命管理，真實記錄轉子運行時間，確保運行安全。

▲ 省心：高效制冷系統，呵護外泌體等樣品，ECO 節能模式，待機電耗最高省 50%。

外泌體的分離雖然復雜，方法多樣，耗時也較長，但如果能優化分離方法，相信在日常的實驗研究中，也能獲得更好的優化提升。